cDNAライブラリーの均一化

東京大学応用微生物研究所

鮎沢　大

目標

　ヒト細胞内のmRNA（遺伝子情報の写しでタンパク質のアミノ酸配列を指令する）は数万種類以上合成されているが、各成分のコピー数には大きな偏りが見られ、数個のものから数万個に及ぶものがあります。この研究は、

を目的としています。

　こうした目標が実現されると、特定の組織でどんな種類のmRNAが発現されているかを効率よく、また、もれなく決定できるようになり（cDNAのカタログ化）、ヒトの各組織の特徴づけ(body mapping)に大きく貢献します。

成果

　オリゴ（dT)ラテックス粒子という担体を用いた簡便な方法を開発し、ヒト細胞から精製したmRNAについて均一化の作業を行った後、均一化cDNAライブラリーの作成を試みました。

　その結果、

ヒト細胞のmRNAをそのコピー数に応じて高中低と３つのクラスに便宜的に分類したとき、高コピー成分は著しく希釈され、中コピー成分は変化なく、低コピー成分の濃縮を確認しました。
均一化操作を調節することによって、各成分をほぼ同数にすることが可能になりました。
下図に高コピー成分であるグロビンmRNAのコピー数が均一化の操作によって著しく低下することを示します。

図の解説

均一化の操作の前（左）後（右）のmRNAをそれぞれcDNAに変換し、大腸菌ファージベクターへ組み込んだ。シャーレに同数のプラークを形成させ、グロビンmRNAを含むプラークをプラークハイブリダイゼーション法によって検出した。約２桁頻度が低下している。